1993年科學(xué)家首次報(bào)道了駱駝中存在一種天然缺失輕鏈、通過重鏈上的可變區(qū)結(jié)合抗原的重鏈抗體（heavy chain antibodies，HCAb），之后陸續(xù)在羊駝、單峰駝和美洲駝等駝科，以及鯊魚、鰩魚等軟骨魚中同樣發(fā)現(xiàn)了類似結(jié)構(gòu)的抗體。人們在重鏈抗體可變區(qū)片段（variable domain of the heavy chain of heavy- chain antibody， VHH） 基礎(chǔ)上開發(fā)了一種僅由重鏈可變區(qū)構(gòu)成的單域抗體（single domain antibody， sdAb），長4 nm，直徑2.5 nm，分子量為12–15 kDa，是目前已知最小的活性抗原結(jié)合蛋白，僅為傳統(tǒng)抗體大小的十分之一，也被稱為納米抗體（nanobody，Nb），其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和優(yōu)越的特性使其成為多領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
納米抗體在環(huán)境污染物、生物毒素等小分子化合物的檢測中不僅降低了檢測下限，提高了靈敏度和精確度，而且通過優(yōu)化測定過程，能夠?qū)崿F(xiàn)快速簡便的檢測，推動(dòng)免疫檢測方法和傳感技術(shù)的快速發(fā)展，納米抗體（nanobody，Nb）在競爭性ELISA法、免疫PCR、熒光偏振免疫分析和橫流免疫分析等免疫檢測技術(shù)的研發(fā)中取得了許多積極成果。
中國農(nóng)業(yè)大學(xué)Liu等用半抗原CBR1與鑰孔血藍(lán)蛋白（keyhole limpet hemocyanin， KLH） 偶聯(lián)，將CBR1-KLH進(jìn)行皮下免疫羊駝，然后經(jīng)提取總RNA、PCR擴(kuò)增VHH片段、酶切、轉(zhuǎn)化等步驟后成功構(gòu)建VHH庫，構(gòu)建的文庫大小約為1×10⁸ CFU/mL，經(jīng)過洗脫、淘選、純化等一系列過程后制備了甲萘威特異性VHHs，開發(fā)了基于納米抗體（nanobody，Nb）的免疫測定方法檢測谷物中的廣譜氨基甲酸酯類殺蟲劑甲萘威（carbaryl），且在谷物樣品中的可重復(fù)性和再現(xiàn)性良好?；?/span>納米抗體（nanobody， Nb）的小分子檢測在這項(xiàng)研究中具有一定的基礎(chǔ)應(yīng)用。
納米抗體（nanobody， Nb）在農(nóng)藥獸藥殘留以及重金屬檢測中表現(xiàn)出較高的應(yīng)用價(jià)值。Li等研究發(fā)現(xiàn)納米抗體-堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP） 對(duì)除草劑2, 4-二氯苯氧基乙酸（2, 4-d） 表現(xiàn)出優(yōu)異的敏感性和特異性（IC50=29.2 ng/mL），2, 4-d深埋在CDR3和CDR2形成的袋中，NB3-9的結(jié)合袋通過氫鍵和疏水力與2, 4-d的相互作用，在此基礎(chǔ)上開發(fā)了以納米抗體-堿性磷酸酶（AP） 融合為基礎(chǔ)的2, 4-d一步熒光酶免疫測定法（one-step fluorescent enzyme immunoassay， FLEIA），通過分析比較確定了FLEIA法可作為一種監(jiān)測環(huán)境中2, 4-d殘留的便捷工具。3-苯氧基苯甲酸（3-PBA） 被廣泛用作人類擬除蟲菊酯類殺蟲劑暴露的常見生物標(biāo)志物，近期El-Moghazy等研制了一種基于納米抗體的新型電化學(xué)競爭免疫傳感器用于3-PBA的快速檢測，檢測限為0.64 pg/mL，檢測限遠(yuǎn)低于膠體金/單克隆抗體/側(cè)向流動(dòng)免疫分析方法，LOD為130 ng/mL。
納米抗體（nanobody， Nb）在檢測食品和環(huán)境真菌毒素方面展現(xiàn)了強(qiáng)大的應(yīng)用前景。Wang等開發(fā)并優(yōu)化了PO8-VHH的納米抗體-多克隆抗體夾心ELISA法測定農(nóng)產(chǎn)品中的曲霉病菌，能夠達(dá)到1 μg/mL濃度的檢測效果，進(jìn)而監(jiān)測農(nóng)產(chǎn)品曲霉污染。Tang等使用OTA和抗OTA Nb分別與兩種尺寸的高效熒光標(biāo)簽-量子點(diǎn)（quantum dot， QD） 共價(jià)耦合，制備了OTA標(biāo)記的GQD結(jié)合物（OTA-GQD） 和Nb28標(biāo)記的RQD偶聯(lián)物（Nb-RQD） 分別作為能量供體和受體，如下圖所示，開發(fā)出一種Nb-FRET（熒光共振能量轉(zhuǎn)移） 免疫傳感器用于檢測谷物樣品中赭曲霉毒素A （ochratoxin， OTA），易于表達(dá)、小尺寸的Nbs可以縮短兩個(gè)QD之間的有效距離，從而提高檢測靈敏度，單步測定可以在5 min內(nèi)完成，檢測限為5 pg/mL。

Nb-FRET免疫傳感器

納米抗體的獲得主要通過免疫羊駝?dòng)裳蝰勼w內(nèi)自身的抗體成熟階段來得到抗體基因，然后通過噬菌體展示篩選技術(shù)來從羊駝抗體庫中篩選得到最適合的抗體序列。整個(gè)流程主要包括羊駝免疫、噬菌體文庫構(gòu)建和抗體篩選三個(gè)階段。

普健生物一站式抗體發(fā)現(xiàn)整體解決方案可為您提供完善的納米抗體定制服務(wù)，從抗原制備、羊駝免疫、噬菌體文庫構(gòu)建、噬菌體文庫淘選、表達(dá)純化到抗體生產(chǎn)、親和力排序，為您交付高標(biāo)準(zhǔn)的噬菌體免疫文庫、陽性菌株、VHH序列及技術(shù)服務(wù)報(bào)告等內(nèi)容。如果您近期有納米抗體定制相關(guān)需求，歡迎撥打服務(wù)咨詢熱線027-87001869，我們將竭誠為您服務(wù)！
我們的優(yōu)勢：
自建養(yǎng)殖基地：每年近百頭成年羊駝?dòng)糜诿庖?，穩(wěn)定提供大量的免疫抗原
庫容大：近千億級(jí)別天然庫
淘選周期短：最快在2周內(nèi)可完成針對(duì)各類靶點(diǎn)的特異性納米抗體快速篩選
親和力高：抗體親和力可達(dá)10^-9M 級(jí)別
樣本來源豐富：免疫庫源自百余只不同種類的駝?lì)悩颖?/span>-羊駝（Alpaca ）、駱駝（Camel）、美洲駝（Llama），提供更高抗體多樣性
超高品質(zhì)：插入正確率100%，序列正確率97%，隨機(jī)選取200個(gè)克隆測序，均無重復(fù)序列
可構(gòu)建免疫庫，獲得更高親和力VHH序列
參考文獻(xiàn)：
SUN S, TAN X, PANG XY, LI M, HAO XJ. Recent advances in the application of nanobody technology: a review. Chinese Journal of Biotechnology, 2022, 38(3): 855-867.