非洲豬瘟(Africanswinefever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)感染豬而引起的一種急性、烈性傳染病，死亡率可達(dá)100%，已被世界動物衛(wèi)生組織(WorldOrganizationforAnimalHealth,WOAH)列為法定報(bào)告動物疫病。目前尚無有效藥物和疫苗用于治療和預(yù)防ASF，主要通過臨床診斷和撲殺感染動物來控制疫情傳播。建立快速、精準(zhǔn)和高效的診斷方法對于疫病防控至關(guān)重要。當(dāng)前，國內(nèi)外ASF相關(guān)診斷技術(shù)主要包括傳統(tǒng)病原學(xué)診斷技術(shù)、新型病原學(xué)診斷技術(shù)以及血清學(xué)診斷技術(shù)等。
傳統(tǒng)病原學(xué)診斷技術(shù)
利用病原學(xué)診斷技術(shù)能夠在ASF疫情早期檢測出動物體內(nèi)是否攜帶病毒。傳統(tǒng)病原學(xué)診斷技術(shù)主要包括病毒分離實(shí)驗(yàn)和紅細(xì)胞吸附實(shí)驗(yàn)(haemadsorption，HAD)。與血清學(xué)檢測方法相比，病原學(xué)檢測結(jié)果可以直接判斷是否感染病毒。此外，病毒核酸檢測包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)和實(shí)時熒光定量PCR(quantitativereal-timePCR,qPCR)等方法，具有靈敏度高的特點(diǎn)。傳統(tǒng)病原學(xué)診斷技術(shù)在ASF的早期診斷和流行病學(xué)調(diào)查中發(fā)揮了重要作用，可降低病毒傳播風(fēng)險(xiǎn)，從而預(yù)防ASF的大規(guī)模傳播流行，減少ASF暴發(fā)導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)損失。
新型病原學(xué)診斷技術(shù)
隨著對ASFV的深入研究和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，一系列新型核酸診斷技術(shù)逐漸被開發(fā)，如微滴數(shù)字PCR(dropletdigitalpolymerasechainreaction,ddPCR)檢測技術(shù)、LAMP技術(shù)、重組酶聚合酶擴(kuò)增(recombinasepolymeraseamplification,RPA)技術(shù)和以CRISPR/Cas(clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats/CRISPR-associatedproteinssystem)為基礎(chǔ)的檢測技術(shù)等，這些新型診斷技術(shù)為ASF的精確診斷和有效防控提供了更加全面的支持。
血清學(xué)診斷技術(shù)
血清學(xué)診斷是基于抗原抗體反應(yīng)來診斷和監(jiān)測是否存在病毒感染。WOAH推薦的ASF血清學(xué)檢測方法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)、間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)(indirectimmunofluorescenceassay,IFA)、間接免疫過氧化物酶實(shí)驗(yàn)(indirectimmunoperoxidasetest,IPT)及免疫層析實(shí)驗(yàn)等。血清學(xué)檢測可以用于豬群疫病狀態(tài)的定期監(jiān)測，能夠發(fā)現(xiàn)病毒的慢性感染，有利于控制潛在疫情的發(fā)生和擴(kuò)散。
目前，ASF檢測技術(shù)主要包括病原學(xué)與血清學(xué)檢測方法，每種方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)。在ASF病原學(xué)檢測方面，PCR和qPCR檢測靈敏性高，但其檢測結(jié)果易出現(xiàn)假陽性；LAMP和RPA等無需專業(yè)設(shè)備，但對人員和工作環(huán)境要求高，易造成氣溶膠污染；ddPCR具有高敏性和特異性，但昂貴的實(shí)驗(yàn)設(shè)備限制了其臨床應(yīng)用;利用CRISPR/Cas系統(tǒng)進(jìn)行檢測的技術(shù)仍然處于初步研發(fā)階段，尚未有商品化的產(chǎn)品。近期流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)了較低毒力的ASFV毒株，能夠引起慢性或持續(xù)性感染，臨床檢測可能會出現(xiàn)病毒核酸檢測陰性但抗體檢測陽性的情況，給ASF病原學(xué)診斷帶來了很大的挑戰(zhàn)。
參考文獻(xiàn)
ZHANG Yuan-yuan, JIN Jia-xin, ZHAO Xu-yang, ZHANG Shuai, LIU Yue-yue, LI Xiang-lin, SUN Ai-jun, LIN Shu-qian, ZHUANG Guo-qing. Research Progress of Novel Diagnostic Methods of African Swine Fever. Journal of Chinese Biotechnology, 2023, 43(10): 62-71 doi:10.13523/j.cb.2305012
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