納米抗體（nanobody， Nb）在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、循環(huán)系統(tǒng)疾病、感染性疾病、腫瘤學(xué)和炎癥性疾病中均表現(xiàn)出優(yōu)異的應(yīng)用價(jià)值和前景，主要聚焦于腫瘤治療且已經(jīng)取得了顯著成效，納米抗體-藥物偶聯(lián)、CAR-T、光動(dòng)力療法(PDT)、靶向放射性核素治療等治療方法的不斷研發(fā)改進(jìn)為患者帶來(lái)了新的希望。

表 2 納米抗體在治療領(lǐng)域的應(yīng)用
Table 2 Therapeutic applications of nanobodies
Nanobodies	Targets	Disease examples
ALX-0171	RSV F-protein	RSV lower respiratory tract infection
T6T16A12	Tetanus neurotoxin (TeNT)	Tetanus
Vobarilizumab	IL-6R	Rheumatoid arthritis
M6495	ADAMTS-5	Osteoarthritis
BI 655088	CX3CR1	Chronic renal disease
LCAR-B38M	BCMA	Multiple myeloma
EGFR-targeted nanobody	EGFR	Squamous cell carcinoma of head and neck
PDL1-VHHs	PDL1	Cancer therapy
Everestmab	GLP-1/GLP-1R	Diabetes mellitus type 2 (T2DM)

靶向腫瘤的納米抗體
Altintas等研發(fā)了一種核心由EGFR靶向納米抗體（nanobody， Nb）與PEG (EGa1-PEG) 結(jié)合的納米粒子(NANAP)，NANAP中裝載有多激酶抑制劑17864，在溶酶體吸收和消化后，激酶抑制劑在細(xì)胞內(nèi)釋放，抑制EGFR陽(yáng)性的14C鱗狀頭頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。Fang等將藥物美登素(DM1) 與MHC-Ⅱ靶向納米抗體VHH7結(jié)合，通過(guò)NIR成像及向健康小鼠和荷瘤小鼠注射VHH7-AF47，解剖后比較熒光信號(hào)證實(shí)了淋巴瘤在肺、肝、脾、淋巴結(jié)等器官中的存在且肝臟中有轉(zhuǎn)移灶，腫瘤浸潤(rùn)導(dǎo)致脾腫大，并證實(shí)了VHH7對(duì)轉(zhuǎn)移灶的靶向性，用A20細(xì)胞系作為模型，VHH7-DM1治療組腫瘤明顯小于對(duì)照組，小鼠平均存活時(shí)間長(zhǎng)于對(duì)照組，可顯著抑制肝臟病灶轉(zhuǎn)移。CD7分子黏附抗體或抗體衍生物后可快速發(fā)生內(nèi)吞作用。Tang等以單價(jià)和雙價(jià)抗-CD7納米抗體為基礎(chǔ)構(gòu)建了免疫毒素，并將其編碼為PG001和PG002，采用WST-8法測(cè)定細(xì)胞毒活性，兩者分別在納摩爾(PG001) 和皮摩爾(PG002) 濃度下能誘導(dǎo)T-ALL細(xì)胞系的高效抗原特異性凋亡，能有效、選擇性地殺傷人白血病細(xì)胞，顯著延長(zhǎng)治療后小鼠的存活時(shí)間。
放射性標(biāo)記的納米抗體（nanobody， Nb）也有望成為靶向放射性核素治療的靶向藥物。其中α粒放射性核素正在用于臨床或臨床前評(píng)估，2Rs15d是一個(gè)HER-2特異性納米抗體（nanobody， Nb），Pruszynski等利用2Rs15d納米抗體（nanobody， Nb）與偶聯(lián)劑2-(4-異硫氰基芐基)-1, 4, 7, 10-四氮雜環(huán)十二烷-1, 4, 7, 10-四乙酸(p-SCN-Bn-DOTA)，并用α發(fā)射性核素錒-225標(biāo)記(α-225Ac)，產(chǎn)生225Ac-DOTA-Nb，這種靶向納米抗體（nanobody， Nb）可以為靶細(xì)胞提供高致死性和局部化的放射治療。
納米抗體（nanobody， Nb）可充當(dāng)光敏劑(photosensitizer, PS) 的載體，用于靶向光動(dòng)力療法(photodynamic therapy, PDT)，通常臨床上使用疏水的光敏劑，不能提供腫瘤特異性。增加腫瘤細(xì)胞特異性受體的表達(dá)水平可以用于靶向這些細(xì)胞，即增加腫瘤對(duì)光敏劑的特異性攝取，如過(guò)度表達(dá)的EGFR等常被用作靶向治療的靶點(diǎn)。采用納米抗體（nanobody， Nb）的PDT可將周圍細(xì)胞的損害降低，納米抗體-PS共軛物選擇性地結(jié)合到靶標(biāo)上，并且在照明后能夠在體外誘導(dǎo)選擇性地殺死腫瘤細(xì)胞。
用于病毒感染的納米抗體
納米抗體（nanobody， Nb）還是中和抗病毒試劑的豐富來(lái)源，可作為治療動(dòng)、植物病毒感染的理想工具。SARS-冠狀病毒-2 (SARS-CoV-2) 的出現(xiàn)導(dǎo)致了一種全球性的流行病，比以往的冠狀病毒傳播性更強(qiáng)，不同的納米抗體（nanobody， Nb）已經(jīng)被開發(fā)用于高親和力結(jié)合受體結(jié)合域(RBD)，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制RBD與人血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2 (ACE2) 的相互作用并中和病毒[65-67]，納米抗體（nanobody， Nb）主要依賴于3個(gè)可變環(huán)，即圖CDR1、CDR2、CDR3形成的抗原結(jié)合位點(diǎn)，納米抗體（nanobody， Nb）相關(guān)技術(shù)的成熟揭示其可作為高效的中和劑，抵御致病性冠狀病毒的侵襲。
普健生物構(gòu)建了千億級(jí)納米抗體VHH文庫(kù)，淘選了針對(duì)新冠NTD domain的納米抗體（nanobody， Nb），獲得了9條VHH序列，并采用哺乳系統(tǒng)進(jìn)行了9條VHH-Fc的重組表達(dá)，9條VHH-Fc序列的表達(dá)量均較高。 Strokappe等成功構(gòu)建了靶向HIV gp41和gp120包膜蛋白的中和性納米抗體，這些新的雙特異性VHH有成為治療劑或殺菌劑的潛力。BBMV是一種種子傳播的植物病毒，Ghannam等通過(guò)噬菌體展示生物淘選分離出8個(gè)BBMV特異性納米抗體，其中3個(gè)成功地抑制了BBMV在體外的傳播且在蠶豆中表達(dá)時(shí)能中和BBMV。Orlov等分離出抑制葡萄扇葉病毒(grapevine fanleaf virus, GFLV) 的納米抗體Nb23，在煙草和該病毒的天然宿主葡萄砧木中穩(wěn)定表達(dá)并觀察到了對(duì)GFLV強(qiáng)烈的特異性抵抗力。
用于抗菌素的納米抗體
抗生素療法是治療細(xì)菌性感染的主要手段，但由于抗生素不合理、過(guò)度的使用，導(dǎo)致耐藥菌甚至超級(jí)細(xì)菌的出現(xiàn)，對(duì)于嚴(yán)重感染的病例，抗生素已經(jīng)無(wú)法發(fā)揮其抗菌抑菌的作用。
而納米抗體（nanobody， Nb）由于特異性強(qiáng)，能精確結(jié)合致病細(xì)菌表面抗原，拮抗細(xì)菌對(duì)宿主細(xì)胞的黏附，從而治療由細(xì)菌引起的感染性疾病，成為開發(fā)抗菌治療的新方式。納米抗體（nanobody， Nb）通過(guò)拮抗細(xì)菌黏附、運(yùn)動(dòng)以及細(xì)菌毒力因子等不同方式對(duì)抗細(xì)菌感染，減少致病菌黏附，如通過(guò)選擇能夠抑制細(xì)菌在上皮細(xì)胞粘附的抗表面抗原的VHH，可用于預(yù)防菌源性腹瀉。此外，納米抗體（nanobody， Nb）還可以防止細(xì)菌或細(xì)菌毒素進(jìn)入細(xì)胞，如VHH R303與內(nèi)化蛋白B (internalin B, Inl B) 上c-Met作用位點(diǎn)結(jié)合，能競(jìng)爭(zhēng)性地抑制李斯特菌入侵赫拉細(xì)胞，進(jìn)一步研究結(jié)果表明其可用于治療和預(yù)防李斯特菌病。
作為解毒劑的納米抗體
在許多國(guó)家，蛇、蝎子、蜘蛛等的毒液嚴(yán)重危害人類健康。研究表明，納米抗體（nanobody， Nb）具有良好的中和能力，Jinkins等成功分離出對(duì)α-眼鏡蛇毒素(α-Cbtx) 具有很高親和力的VHHs (C2和C20)，它們能夠完全中和α-Cbtx的致死作用。Calderon等開發(fā)了一套針對(duì)黃腭蛇毒出血性和肌毒成分的納米抗體（nanobody， Nb），通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)確定了Nbs H6、H8和H9具有最好的蛇毒出血作用中和活性，Nbs M28、M35、M43、M67、M85和M88可作為較好的肌毒作用抑制劑。Ahmadi等總結(jié)了幾種蝎子毒液治療的抗毒劑，與傳統(tǒng)抗毒劑相比，納米抗體因其具有較高的體外穩(wěn)定性和低的免疫原性，具有發(fā)展為下一代蝎子抗毒血清的潛力，如有研究表明anti-HNc納米抗體（nanobody， Nb）能夠?qū)Χ拘?/span>HNc類毒素的侵害提供完全的保護(hù)，一種雙特異性NbF12-10展現(xiàn)了出色的毒液中和能力，對(duì)致命的蝎子蜇傷也能提供全面保護(hù)。因此，未來(lái)納米抗體（nanobody， Nb）可作為解毒劑以提供安全有效的治療方法。
普健生物擁有自建養(yǎng)殖基地，每年近百頭成年羊駝?dòng)糜诿庖?，穩(wěn)定提供大量的免疫抗原。擁有近千億級(jí)別天然庫(kù)，最快在2周內(nèi)可完成針對(duì)各類靶點(diǎn)的特異性納米抗體快速篩選，抗體親和力可達(dá)10-9M 級(jí)別，插入正確率100%，序列正確率97%，隨機(jī)選取200個(gè)克隆測(cè)序，均無(wú)重復(fù)序列；并且免疫庫(kù)源自百余只不同種類的駝?lì)悩颖?/span>-羊駝（Alpaca ）、駱駝（Camel）、美洲駝（Llama），提供更高抗體多樣性以構(gòu)建免疫庫(kù)，獲得更高親和力VHH序列。

隨著研究的不斷深入，納米抗體（nanobody， Nb）優(yōu)越的特性也將會(huì)在更多領(lǐng)域展現(xiàn)其應(yīng)用價(jià)值，其高穩(wěn)定性或可使其在醫(yī)學(xué)和臨床應(yīng)用中發(fā)揮作用，如解決疫苗或抗體藥物研發(fā)中存在的療效、安全性、費(fèi)用等一系列問(wèn)題及抗生素耐藥性的問(wèn)題，或能實(shí)現(xiàn)多途徑給藥等。我們期待未來(lái)納米抗體（nanobody， Nb）更多引人注目的研究成果的問(wèn)世。
參考文獻(xiàn)：
SUN S, TAN X, PANG XY, LI M, HAO XJ. Recent advances in the application of nanobody technology: a review. Chinese Journal of Biotechnology, 2022, 38(3): 855-867.