薩摩矮病毒（Satsuma dwarf virus，SDV）自1952年被初次描繪為植物移轉(zhuǎn)病癥（Yamada & Sawamura，1952）后，其存在可回溯到二十世紀(jì)三十年代，在日本的靜岡縣，它一直被視為一種神秘的疾病。直到1962年，人們才發(fā)現(xiàn)了這種病毒的實體——直徑在26-28nm之間的二十面體病毒顆粒（Saito & Hibino，1962）。更令人驚奇的是，在日本的一些農(nóng)村地區(qū)，還出現(xiàn)了柑橘花葉病、臍橙感染斑駁病和旱臺矮病，所有這些都被確認(rèn)為由類似病毒所引起的。
薩摩矮病毒（Satsuma dwarf virus， SDV）及其相關(guān)病毒在柑橘(Citrus unshiu Marc.)中引起嚴(yán)重的疾病，受影響的樹木表現(xiàn)為矮化和生長不良，產(chǎn)量逐漸下降。柑橘花葉病導(dǎo)致柑橘等柑桔品種果皮出現(xiàn)各種綠色花紋，商業(yè)價值下降。這些病毒被認(rèn)為通過嫁接和土壤傳播。目前，沒有有效的措施從受感染的樹木上清除這些病毒。因此，及早發(fā)現(xiàn)并消除受感染的樹木非常重要，特別是對于最大限度地減少與這些病毒感染相關(guān)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
SDV和SDV相關(guān)病毒的二十面體病毒粒子含有二分正義單鏈RNA基因組（RNA1；7.0 kb，RNA2；5.4 kb）。所有病毒粒子均由RNA42編碼的兩種外殼蛋白（大成分22 kDa和小成分2 kDa）組成。SDV和SDV相關(guān)病毒已通過PCR及酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）進(jìn)行檢測。由于PCR和ELISA需要專門的技術(shù)和昂貴的設(shè)備和試劑，因此已經(jīng)開發(fā)出一種免疫層析測定（ICA）用于在現(xiàn)場樣品中檢測這些病毒。特別是，Kusano等人開發(fā)的ICA系統(tǒng)由于其更高的靈敏度和可靠性，不僅可用于診斷 SDV，還可用于診斷 SDV 相關(guān)病毒，例如柑橘花葉病毒（CiMV）和臍橙傳染性斑駁病毒（NIMV），被廣泛應(yīng)用于種植領(lǐng)域。然而，最近報道了一種新型CiMV分離株——在日本愛媛縣發(fā)現(xiàn)的其中一種分離株CiMV Az-1（B291）導(dǎo)致廣泛感染，并對薩摩柑橘種植造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。新型的CiMV分離株難以使用ICA系統(tǒng)進(jìn)行鑒定，因此迫切需要開發(fā)一種新的診斷系統(tǒng)來檢測這些分離株。
為了開發(fā)ICA試劑盒等診斷系統(tǒng)，開發(fā)高特異性和高親和力的單克隆抗體（mAb）至關(guān)重要。研究人員為了獲得抗CiMV單克隆抗體（mAb），通過對應(yīng)于CiMV外殼蛋白中11-475殘基（485 aa）的肽對家兔進(jìn)行免疫，因為兔抗體具有高親和力，可以成為診斷的有力工具。
最終獲得的兔抗CiMV單克隆抗體使用表面等離子體共振（SPR）進(jìn)行動力學(xué)檢測，顯示出單克隆抗體（mAb）均對CiMV肽具有高親和力。為了確認(rèn)本研究獲得的單克隆抗體（mAb）是否檢測到葉片中的CiMV和SDV樣病毒，通過ELISA和斑點(diǎn)印跡分析對單克隆抗體（mAb）進(jìn)行了評估。結(jié)果表明，研究獲得的單克隆抗體（mAb）可識別CiMV Az-1（B291）分離株。通過利用這些mAb，研究人員期望可以開發(fā)出一種針對CiMV Az-1（B291）分離株的靈敏且簡單的診斷試劑盒。
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案例展示
