抗體是由高等生命形式的免疫系統(tǒng)中的B細(xì)胞制造的蛋白質(zhì),作為一種適應(yīng)性特征,使身體能夠處理對生物體構(gòu)成威脅的入侵外來分子??贵w的自然功能涉及它們附著在抗原(屬于入侵的異物)上,以標(biāo)記它們被免疫系統(tǒng)破壞。
這種附著在特定分子上的天生傾向已經(jīng)確立了它們在科學(xué)研究中的用途。由于可以選擇已知會附著在某些抗原上的特異性抗體,因此研究人員可以使用抗體來識別某些物質(zhì)的存在。因此,在細(xì)胞蛋白質(zhì)功能的研究中,抗體的使用變得非常依賴。
科學(xué)家們已經(jīng)開發(fā)出許多利用抗體性質(zhì)來研究細(xì)胞和組織中蛋白質(zhì)的技術(shù)。免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、蛋白質(zhì)印跡、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)和FACS以及ELISPOT等應(yīng)用都是利用抗體的成熟方法。為了充分利用這些強大的研究技術(shù),必須選擇適合特定應(yīng)用的正確抗體,因此,為您的實驗研究選擇合適的抗體是第一步也是尤為重要的一步。
免疫組織化學(xué)具有低至中等通量,可用于固定細(xì)胞和組織,可以產(chǎn)生細(xì)胞定位,具有高空間分辨率,通常專注于單個蛋白質(zhì),可以一次對多種蛋白質(zhì)進(jìn)行成像,并且是定性和半定量的。
研究定位的另一種技術(shù)是免疫細(xì)胞化學(xué)。該技術(shù)具有低到高通量,可用于固定細(xì)胞和組織,可以產(chǎn)生亞細(xì)胞定位,可以一次對多種蛋白質(zhì)進(jìn)行成像,并且是定性和半定量的。然而,其空間分辨率受到組織結(jié)構(gòu)的限制。
蛋白質(zhì)印跡是研究蛋白質(zhì)濃度的合適技術(shù)。它具有低到中等通量,可用于細(xì)胞和組織裂解物,產(chǎn)生相對蛋白質(zhì)水平,可以建立分子量,亞型和翻譯后修飾,并且是半定量的。
ELISA是研究蛋白質(zhì)相互作用的合適技術(shù)。該方法具有中到高通量(96孔板),可用于研究血清/血漿,活或固定細(xì)胞和組織,它產(chǎn)生準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)水平,它是定量和定性的。
ELISA也可用于研究表達(dá),其特征如上所述。流式細(xì)胞術(shù)和FACS是研究表達(dá)的替代技術(shù)。它具有從低到高通量(最多384孔板)。它可用于固定或活細(xì)胞,可以確定化學(xué)和物理性質(zhì),如大小、表面標(biāo)志物的表達(dá)等。它可用于定量和分選細(xì)胞(FACS)。最后,它是一種定量方法。
選擇一抗
選擇一抗時,必須考慮正確的類型,單克隆或多克隆。
單克隆抗體僅識別抗原上的單個表位,它們產(chǎn)生的背景噪音較小,因為它們不太可能與其他蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。此外,它們的同質(zhì)性非常高,這意味著批次之間的變異性很低。它們在與相關(guān)分子混合物中的抗原結(jié)合方面也非常有效。然而,由于它們太具體,它們不能在各種物種中工作。它們也容易受到抗原化學(xué)處理的表位丟失的影響。
另一方面,多克隆抗體的特征如下:它們識別任何一種抗原上的多個表位,它們具有高親和力,可以幫助放大來自低表達(dá)蛋白的信號,它們更耐受抗原的微小變化,并且它們可用于檢測來自免疫原性以外的物種的蛋白質(zhì)。然而,缺點是它們?nèi)菀壮霈F(xiàn)批次間的差異,并可能產(chǎn)生背景信號。
選擇二抗
所使用的方法類型將告知哪種二抗是合適的。
-IHC:HRP或AP偶聯(lián)、片段、生物素化(親和素/鏈霉親和素與酶或熒光染料偶聯(lián))、熒光染料(如AlexaFluor®、Cy染料、FITC®和PE)以及預(yù)吸附。
-ICC:片段抗體,生物素化(親和素/鏈霉親和素與熒光染料偶聯(lián)),熒光染料,FITC和PE,并預(yù)吸附。
-蛋白質(zhì)印跡:HRP或AP偶聯(lián)、生物素化(親和素/鏈霉親和素與酶偶聯(lián))、熒光染料(Alexa680和Alexa790)、輕鏈特異性抗體VeriBlotforIP。
-ELISA和ELISPOT:HRP或AP偶聯(lián),生物素化(親和素/鏈霉親和素與酶偶聯(lián)),單克?。ㄌ貏e是亞型特異性抗體,如抗IgG1)
-流式細(xì)胞術(shù)和FACS:熒光染料,Cy染料、FITC®和PE、生物素化(親和素/鏈霉親和素與熒光染料偶聯(lián))、單克隆、F(ab')2片段和偶聯(lián)一抗,可最大限度地提高時間效率。
普健生物具有完善的基礎(chǔ)檢測實驗服務(wù)平臺,擁有三大技術(shù)服務(wù)平臺:分子生物學(xué),細(xì)胞生物學(xué),免疫學(xué)。分子生物學(xué)可以提供載體構(gòu)建,熒光定量PCR
檢測,雙熒光素酶檢測等技術(shù)服務(wù)。細(xì)胞生物學(xué)可以細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染,CCK8,MTT,細(xì)胞劃痕,transwell,平板克隆,流式凋亡/周期等檢測。免疫學(xué)可以提供包括Westernblot,免疫熒光,免疫組化,Co-IP等檢測。