傳說，
鳳凰是人世間幸福的使者。
每五百年，
它就要背負著
積累于人世間的所有不快和仇恨恩怨，
投身于熊熊烈火中自焚，
以生命的美麗終結(jié)
換取人世的祥和與幸福。
在肉體經(jīng)受了巨大的痛苦和輪回后
它們才能以更美好的軀體重生。
然而，
我不是鳳凰。
我只是一個標本。
我的主人正被痛苦的癌癥折磨，
為了減輕她的疼痛，
我必須犧牲自己。
烈火，
或冰凍，
總要選擇一種死的方式。
烈火讓你灰飛煙滅，
冰凍卻能讓我活成永恒，
美其名曰“重生”。
然而
聽醫(yī)生說，
即使是冰凍，
死的方法也有很多種。
最快捷、簡便的要數(shù)冰凍切片了，
它還可以用于手術(shù)中的快速病理診斷。
1
干脆一點的比如直接冰凍切片法多用于新鮮組織、甲醛固定組織和冰箱冷藏組織等。組織塊不經(jīng)任何包埋劑而直接放在制冷臺上冷卻后再進行切片，如恒冷箱切片、甲醇制冷器制冷箱切片、二氧化碳冰凍法切片、半導體制冷冰凍切片等。
2
如果標本很脆弱或者有樹枝狀突起（當切片后投入水中時，常常引起分散，甚至發(fā)生丟失；如果間隙較多，還會因發(fā)生散亂而失去相互間的聯(lián)系造成移位）則可以嘗試明膠冰凍切片法。
3
或者選擇冰凍切片粘片法三種中的任一種。
3.1蛋白甘油粘片法
烘烤的溫度不超過40℃，
待烤干后立即取出，
因為時間過久或溫度過高切片都容易破碎。
烤干后用70%乙醇及蒸餾水洗后即可染色。
3.2Lillie明膠粘片法
則是將切片放入1%明膠水溶液數(shù)分鐘，
撈出置于載玻片上，
將多余液體傾去。
入環(huán)保組織固定液中
固定5 min,水洗10 min，即可染色。
3.3乙醇明膠粘片法
則需將切片浸入
0.1%或0.75%明膠溶液
（以40%乙醇配制）
數(shù)分鐘，
撈于載片上，
經(jīng)室溫短時干燥，
入氯仿1 min ，
經(jīng)95%及70%乙醇洗去氯仿，
再經(jīng)蒸餾水洗后染色。
他們又說
現(xiàn)在國內(nèi)外有許多廠家
用高分子材料
配制成了冰凍切片包埋液，
可直接在切片機組織卡盤（chuck）上
加少許包埋液，
在其固化前將標本嵌入，
然后周圍加入少許包埋液穩(wěn)定。
常規(guī)切片厚度為2-100微米。
或者
在盛標本的包埋模具內(nèi)，
擠出適量冰凍包埋液，
將標本放入后再加包埋劑完全淹沒，
如有氣泡則用針頭或吸頭吸出。
然后將裝有標本和包埋液的模具，
正置于切片機冷室內(nèi)冰凍10分鐘，
至包埋液固化。
也可將模具置于液氮或-40℃-70℃度冰箱冰凍固化保存。
突然覺得，
原來死也是一件極其麻煩的事情。
正當我猶豫不決的時候，
很多已經(jīng)重生的小伙伴，
走到我身邊，
給我說了它們自己的故事。
原來
小A的出現(xiàn)是因為在手術(shù)進行中，醫(yī)生突然發(fā)現(xiàn)它主人的病變與原診斷和原定手術(shù)方案不相符合；
小B的使命是為了了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的淋巴細胞或者轉(zhuǎn)移的程度，以利于確定是否需要徹底掃除淋巴結(jié)或者采取其他的治療措施；
小C需要幫一個惡性腫瘤患者了解其手術(shù)范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤組織；
小D誕生于一個病人在做剖腹探查時發(fā)現(xiàn)的腫塊；
小E給我展示了它身上的的脂肪和脂類物質(zhì)，它們來源于脂肪瘤、肉瘤或某些科研組織等；
小F身上，有一些酶，比如ATP酶，琥珀酸脫氫酶等。
小G身上特殊的染色效果，據(jù)說是用Eager氏法 和Marchi氏法獲得的。
聽完了大家的訴說，
我堅定了自己成為冰凍切片的決心，
便毫不猶豫地推開了白衣天使的門。
他們馬上召集了
冰凍切片領域的專家，
召開了一個座談會。
院長首先發(fā)話：
“為了讓顧客更好地了解我們要做的事，
現(xiàn)在請各部門負責人闡述一下手術(shù)過程?！?
“第一步，是取材?！?/strong>
A:“取材的時候我們會盡量保持刀具與臺面的干燥，避免標本與水接觸，即使標本中含有水或者血性液體，我們也會用干燥的紗布或者濾紙把水吸干，這樣可以提高切片的質(zhì)量從而防止空洞、冰晶等現(xiàn)象的出現(xiàn)。”
B:“由于脂肪組織不易于切片，我們在取材時會盡量去除?！?
C:“取材時也會注意標本結(jié)構(gòu)的完整性，會帶有背膜、皮質(zhì)、髓質(zhì)或者內(nèi)膜等結(jié)構(gòu)?！?
D:“此外，還會考慮標本結(jié)構(gòu)的方向性以及標本切片的方向性，如腎標本的取材，標本的截面會包括腎背膜、腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)3種結(jié)構(gòu)。若您沒有立刻切片的要求，我們則可以先清理然后快速放入液氮保存?！?
A:“取材后會對標本進行包埋、切片、固定等前期處理?！?
“快速冷凍可以有效降低冰晶的形成。新鮮的組織要快速冷凍，一般情況下，較硬組織如子宮肌瘤要冷凍1-2分鐘，軟組織以及細胞豐富的組織如肝、脾和淋巴結(jié)等需要2-4分鐘，脂肪組織需要5-6分鐘，脂肪組織的切片厚度要達到8-10 um才更有利于觀察?！?
“現(xiàn)常用的冰凍包埋液是由高分子聚合物組成的透明粘稠液體，速冷時固化，其冰凍速度和軟硬韌度與組織細胞相近，因此能保證最佳的組織細胞形態(tài)，并具有支持填充、減少皺褶和斷裂的作用，能切出2-3微米的超薄切片。這個您可以放心?！?
“溫度過低、過高會導致組織塊過硬或者硬度不夠，從而影響切片質(zhì)量，產(chǎn)生搓板狀、梯田狀、厚薄不均、破碎及粉末狀現(xiàn)象。根據(jù)不同組織的形態(tài)和組成成分的不同，未固定的組織合適的對應溫度大致如下：乳腺、卵巢、子宮等：-20 ~-25℃；胃腸等：-18~-20℃；甲狀腺、肝、腎、脾等：-15℃左右；脂肪組織一般在-35℃以下。固定好的組織合適的溫度一般為-12~-17℃?！?
“切片時會提前將鋒利的刀片調(diào)節(jié)合適的角度安在刀架上，會保證切片刀在適宜的溫度下，以防止切片粘連。用力會均勻、柔和，也會防止污染及切片皺褶，盡量切到組織最大面，為了切到病理部位，必要時可能要連續(xù)切片，然后用刷子輔助展開切片，沾在載玻片上。片子沾好后，就立刻將它浸沒于固定液中。固定液種類很多，常用的有冰丙酮、多聚甲醛、環(huán)保組織固定液等。如果組織固定延遲會出現(xiàn)風干的假象，當組織片粘在有溫度的玻片上時就會出現(xiàn)明顯的風干假象，表現(xiàn)為核的細節(jié)丟失及胞漿液的溢出。我想這一點您也需要了解并做好心理準備?！?
看著他們口若懸河胸有成竹的樣子，
我頓時充滿了信心。
會議結(jié)束后
主刀醫(yī)生遞給了我一份手術(shù)合同，
我從頭到尾看了一遍，
發(fā)現(xiàn)合同的末尾明確寫了
冰凍切片的常見問題及解決方案：
如下所示：
1 切片的厚度：
一般情況推薦切6um厚，這種厚度使染色更加飽滿，層次清晰，6um的片子可以有更多的時間去避免風干假象，也會減少冰晶所造成的細胞核空洞。特殊情況下可能需要更厚或更薄的片子。
2 脫片現(xiàn)象：
脫片一般有以下幾種情況：
（1）本身非常干燥或過度脫水的組織；
（2）組織片的周長與面積比過大，像細條形的組織容易受染色缸內(nèi)液體渦旋應力的影響而脫落，同樣包括薄的纖維囊腫及不規(guī)則的壞死組織，太厚的組織也不例外；
（3）少數(shù)情況需要使用100%的乙醇固定；
（4）一張玻片貼多個片子時，片子周圍的包埋物相互重疊；
（5）組織內(nèi)含過多的壞死組織，組織細胞壞死崩解后，局部的滲透壓升高，吸收水分，切片一經(jīng)固定，水分溢出，壞死組織失去支撐作用，染色時容易脫落；
（6）固定液濃度過低；
（7）載玻片不干凈。
3 冰晶的形成：
含水量特別多的組織冷凍時會出現(xiàn)肥皂泡樣的空隙，主要是因為組織中的水分凝固時形成球形的冰晶，擠壓纖維組織條而產(chǎn)生泡沫樣的形狀。組織片在進一步處理時泡沫樣的水分又重新分布于間質(zhì)，而未曾冷凍的組織顯示出間質(zhì)的水腫。這些水分巨多的組織在切片時很難保證不裂開，應盡可能提高切片的溫度。
4 冰凍假象：
組織在冰凍時候的變化與水結(jié)冰膨脹是密切相關(guān)的，細胞實性的組織會受到冰泡膨脹的擠壓，這在水腫組織非常明顯。有些組織細胞漿內(nèi)會出現(xiàn)一些空泡，也是冰凍假象的一種。
如此周全的考慮
已經(jīng)完全消除了我的后顧之憂，
于是，
我愉快地簽下了自己的名字。
靜待重生。
……
手術(shù)很成功，
所以，
我又可以在這里和你們說話了。
