5月5日，美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）通過Librela（Bedinvetmab）用于控制狗骨關節(jié)炎(OA)相關疼痛的藥物上市批準。至此，人類最好的朋友有了一種治療鈍性骨關節(jié)炎疼痛的新療法。

Librela是FDA第二個被批準用于動物的單克隆抗體（mAb），也是FDA批準用于狗的第一種單克隆抗體（mAb）。此前，FDA于2022年1月13日批準了用于貓的單克隆抗體Solensia（Frunevetmab）——這是FDA批準的首款用于任何動物的單克隆抗體動物新藥，也是第一種用于控制貓骨關節(jié)炎相關疼痛的藥物。

犬單克隆抗體藥物作用機制

骨關節(jié)炎 (OA) 是狗最常見的關節(jié)炎，據估計，其患病概率超過25%?；加泄顷P節(jié)炎的狗，關節(jié)中的軟骨墊會破裂，導致骨骼相互摩擦。除了疼痛，狗的關節(jié)活動受限，有時還會出現骨刺。

神經生長因子（Nerve growth factor，NGF）是疼痛感受的重要介質，它作為一種可溶性信號蛋白，通過與兩種不同的細胞表面受體（NGFRs）——高親和力的NGF特異性原肌球蛋白受體激酶a (TrkA)和低親和力的p75神經營養(yǎng)因子受體（p75NTR）結合來調節(jié)其活性。

Figure 1.Schematic diagram of the involvement of nerve growth factor (NGF) in nociception and nervous system plasticity

Bedinvetmab作為一種犬單克隆抗體(mAb)，可與NGF結合并抑制其與TrkA和p75NTR的相互作用。

犬單克隆抗體的出現

從1986年FDA批準第一批單克隆抗體上市，距今已有37年的歷史，單克隆抗體具有靶向性好、有效安全、作用長效等優(yōu)勢，在人醫(yī)領域已作為治療腫瘤及免疫性疾病的重磅產品。近年來，抗體類藥物每年約占FDA新藥批準的五分之一，單克隆抗體作為新型抗體藥物療法不僅在人類炎癥以及過敏癥等多種疾病中有效應用，還隨著單克隆抗體技術的成熟逐漸應用于動物醫(yī)療領域。

Figure 2.Antibodies are large glycoproteins typically composed of two heavy chains and two light chains, each of which contain a variable domain (variable heavy (VH) or variable light (VL) and a constant domain (constant heavy (CH) or constant light (CL).  The amino acid sequence of the variable domain varies greatly among antibodies and six ‘hyper-variable’ complementarity-determining region (CDR) loops within the variable domains give the antibody its specificity for binding to an antigen.  In contrast, the constant domain is identical in all antibodies of the same isotype but differs in antibodies of different isotypes (IgA, IgD, IgE, IgG and IgM).  The tail region of the constant domain (Fc region: CH2 and CH3) may direct immune effector functions by binding to cell receptors expressed on immune cells or initiating complementary-dependent cytotoxicity.  Murine monoclonal antibodies (mAbs) are antibodies produced from individual cloned and immortalised mouse B cells.  Most useful therapeutic antibodies have been constructed with the gamma immunoglobulin (IgG) isotype.  Chimeric mAbs are antibodies made by fusing the genes encoding the variable region from a murine-derived mAb, with those from an immunoglobulin (Ig) constant region from a human antibody.  Humanised mAbs retain only the CDRs (part of the variable domain from the original murine-derived mAb that binds to the specific antigen).  Fully human mAbs have no murine sequences.  Caninised and felinised mAbs are fully canine or feline specific.

單克隆抗體的制備

單克隆抗體開發(fā)目前有3種主流方法線路，可以點擊《技術分享第27期|終于有人把主流的單抗開發(fā)平臺總結清楚了》進行回顧。

雜交瘤技術平臺，該技術篩選的是抗體分泌型漿B細胞（Plasma B cells）；

噬菌體展示技術平臺，該技術是通過B細胞獲取抗體序列然后建庫淘選獲得目標抗體；

單B細胞測序技術平臺，該技術是單B細胞直接測序或體外培養(yǎng)篩選后測序。

犬單克隆抗體制備的關鍵流程

已獲批的Bedinvetmab單克隆抗體基于噬菌體展示技術，使用了DNA互補文庫將供體mAb可變區(qū)重鏈和輕鏈序列轉換為僅包含目標物種內識別的氨基酸的mAb序列。因此，噬菌體文庫的建立尤為關鍵。

按照類別不同，噬菌體抗體文庫有scFv庫、Fab庫和VHH庫之分。按照來源不同，噬菌體抗體文庫有隨機肽庫，免疫庫和天然庫之分。普健生物利用來自26只不同種類的犬源PBMC（Peripheral Blood Mononuclear Cell,外周血單個核細胞）構建了一個

犬源scFV天然抗體庫

（此處感謝狗狗們的無償獻血，天然庫是不用免疫動物的哦）

編號	文庫名稱	來源	總庫容量（cfu）	序列正確率
1	DN-1-ScFv	A犬（5只） B犬（5只）	1.461 X 109	97.8%
2	DN-2-ScFv	C犬（5只） D犬（5只）	1.361 X 109	95.8%
3	DN-3-ScFv	E犬（5只） F犬（5只）	1.158 X 109	100%
總計	DN-ScFv	6個品種 共26只	3.98 X 109	97.6%

并用PCR檢測了抗體片段的插入情況-正確率100%；

我們的服務

經過多年技術沉淀和優(yōu)化，提供從抗原制備，到抗體生產，標記，檢測，測序一站式服務。

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服務優(yōu)勢

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普健生物（AtaGenix）于2012年在武漢成立，作為武漢國家生物產業(yè)基地公共服務平臺—光谷抗體發(fā)現與篩選公共服務平臺。普健生物（AtaGenix）專注于重組蛋白、抗體、診斷原料、抗體藥物發(fā)現等自主技術平臺的建設和下游生物醫(yī)藥產品的戰(zhàn)略合作。經過10年的發(fā)展，普健生物已成為一家立足武漢，業(yè)務覆蓋全國、輻射全球的高新技術服務企業(yè)。目前公司擁有4200平米自建實驗室（包含800平高標準BSL-2級細胞房），擁有齊全蛋白抗體開發(fā)設備500余套，包括高通量蛋白純化儀、Agilent 流式細胞分析儀，全自動HPLC分析儀，openSPR蛋白、抗體親和力測定儀，Olympus熒光顯微鏡，BTX電融合儀，2*7L微生物發(fā)酵罐，中試型高壓均質機，全自動管式化學發(fā)光儀，以及配套的高速離心機，細胞計數儀及大容量細胞培養(yǎng)搖床。公司先后獲得榮譽：3551人才計劃、高新技術企業(yè)、技術先進型服務企業(yè)、光谷瞪羚企業(yè)+

參考文獻：

[1]Masataka Enomoto.(2019).Anti-nerve growth factor monoclonal antibodies for the control of pain in dogs and cats.Veterinary Record,Volume184, Issue1,Pages 23-23.

[2]FDA Approves First Monoclonal Antibody for Dogs with Osteoarthritis Pain,05/05/2023,from https://www.fda.gov/animal-veterinary/cvm-updates/fda-approves-first-monoclonal-antibody-dogs-osteoarthritis-pain

[3]M. Krautmann.(2021).Laboratory safety evaluation of bedinvetmab, a canine anti-nerve growth factor monoclonal antibody, in dogs.The Veterinary Journal,Volume 276, October 2021, 105733