納米抗體作為一種用途廣泛的小分子抗體，因其體積小、親水性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、易于生產(chǎn)等優(yōu)勢(shì)越來(lái)越受歡迎，尤其在疾病診斷與治療、病原檢測(cè)、藥物殘留分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域都展現(xiàn)出了良好的應(yīng)用前景。
納米抗體(Nanobody，Nb)指重鏈單域抗體VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody) ，該類(lèi)抗體只包含一個(gè)重鏈可變區(qū)（VHH）和CH2，CH3區(qū)，相比于其他抗體，輕鏈天然缺失。納米抗體晶體直徑2.5nm，長(zhǎng)4nm，分子量一般在12-15KD，是自然存在的可以和抗原結(jié)合的最小片段。 納米抗體VHH的表面大概只有10個(gè)氨基酸與人VH的不同，在FR2中存在有四個(gè)特異的氨基酸：普通抗體FR2中V37、G44、L45和W47這4個(gè)氨基酸殘基是在進(jìn)化中相當(dāng)保守的疏水性殘基，而VHH中，這四個(gè)突變?yōu)橛H水性的氨基酸殘基F37、E44、 R45、G47，增加了VHH的水溶性。利用這一特性，可將人源抗體VH的序列進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)FR2中的一些氨基酸進(jìn)行VHH特征性改造，從而使VH抗體的穩(wěn)定性和溶解性更好，并且保持原有的特異性和親和力。
納米抗體和傳統(tǒng)抗體的優(yōu)劣對(duì)比

性能	傳統(tǒng)抗體	納米抗體
抗體表達(dá)	在哺乳表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)，周期長(zhǎng)、成本高	既可在哺乳系統(tǒng)中表達(dá)，又可在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)，表達(dá)的抗體具有高水溶性、易復(fù)性
抗體穩(wěn)定性	易失活，高溫或極度PH下失效或分解	高穩(wěn)定性，高耐性，90℃處理后依然保持較高的活性
免疫原性	較高	較低
組織穿透力	較低	較高，可穿透血腦屏障
半衰期	較長(zhǎng)	較短，血清清除速度快

納米抗體的制備
目前，制備納米抗體主要途徑使用免疫庫(kù)和天然庫(kù)進(jìn)行制備。普健生物通過(guò)十余年的抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)的積累和迭代，具備完善的納米抗體天然庫(kù)和免疫庫(kù)制備平臺(tái)，提供羊駝免疫，納米抗體VHH噬菌體建庫(kù)及淘選技術(shù)服務(wù)，更有千億級(jí)VHH納米抗體天然噬菌體文庫(kù)可淘選各類(lèi)靶點(diǎn)抗原，大大縮短藥物開(kāi)發(fā)周期。

服務(wù)項(xiàng)目	服務(wù)內(nèi)容	服務(wù)周期	交付內(nèi)容
天然庫(kù)淘選	3-4輪淘選 多克隆ELISA驗(yàn)證 單克隆ELISA驗(yàn)證 陽(yáng)性克隆ELISA驗(yàn)證 測(cè)序 實(shí)驗(yàn)報(bào)告	4周	陽(yáng)性菌株1-3株 VHH序列1-3條 技術(shù)服務(wù)報(bào)告
免疫庫(kù)建庫(kù)及淘選	抗原質(zhì)檢 羊駝免疫 噬菌體文庫(kù)構(gòu)建 噬菌體文庫(kù)淘選	10周	噬菌體免疫文庫(kù)(大于5*108 pfu的phage) 陽(yáng)性菌株5-10株 VHH序列5-10條 技術(shù)服務(wù)報(bào)告

針對(duì)靶點(diǎn)B的特異性納米抗體制備過(guò)程
普健生物可以提供針對(duì)特定靶點(diǎn)的特異性納米抗體定制服務(wù)，包括抗原檢測(cè)，羊駝免疫，采血，效價(jià)檢測(cè)，納米抗體噬菌體庫(kù)構(gòu)建及淘選，特異性高親和力納米抗體篩選，表達(dá)，檢測(cè)一條龍服務(wù)。親和力可以達(dá)到10⁸~10¹⁰M級(jí)別。
1. 靶點(diǎn)B免疫羊駝，進(jìn)行四輪免疫后采血提取PBMC，經(jīng)RNA提取，反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后擴(kuò)增獲取VHH可變區(qū)片段；
2. 免疫羊駝納米抗體庫(kù)的構(gòu)建：
將獲得的VHH可變區(qū)片段連入噬菌體展示載體，電轉(zhuǎn)宿主菌，最終獲得庫(kù)容為8.76x10^9納米抗體庫(kù)，插入正確率為100%
3. 免疫羊駝納米抗體庫(kù)的淘選及篩選：
利用構(gòu)建的免疫羊駝納米抗體庫(kù)，針對(duì)靶點(diǎn)B蛋白，完成三輪淘選，其淘選富集度如下： 篩選96個(gè)克隆，其中陽(yáng)性克隆共94個(gè)，陽(yáng)性率為97.9%。 排除重復(fù)序列，最終獲得了7條不同的抗體序列。將這些抗體序列表達(dá)成可溶性的VHH抗體蛋白，進(jìn)行再次驗(yàn)證，結(jié)果如下： 隨機(jī)挑選兩條抗體蛋白進(jìn)行親和力測(cè)定，結(jié)果如下：
R1P1-A10：KD：6.49E-09M R1P1-H12：KD：1.52E-07M