近年來，基于基因工程原理發(fā)展起來的報告基因技術(shù)逐漸成為最具有發(fā)展?jié)摿蚍治龉ぞ咧弧?

報告基因是一類編碼可供檢測的酶與蛋白的基因，是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究領(lǐng)域中用于分析基因轉(zhuǎn)錄和調(diào)控的一種便捷工具，可用來分析結(jié)構(gòu)基因旁側(cè)區(qū)域潛在的順式元件（如啟動子、增強子和沉默子等）和反式作用因子間的相互作用關(guān)系。

啟動子是真核基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游一段長度不等的特異性序列，該片段有多種調(diào)節(jié)因子的結(jié)合位點，能順式調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄，因此可以通過檢測啟動子的激活程度間接定量蛋白(如Ⅰ型干擾素)的表達量。

作為報告基因的條件：

編碼產(chǎn)物的活性不受宿主細(xì)胞的干預(yù)；

編碼產(chǎn)物在宿主細(xì)胞本身不存在，易區(qū)分；

編碼產(chǎn)物的活性測定必須快速、簡便、靈敏度高、重復(fù)性好。

常用的報告基因：

氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因（CAT）、β-gal、熒光素酶基因（Luc）

報告基因的應(yīng)用：

探討啟動子作用，細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，作為分子標(biāo)記，生物大分子間的相互作用，RNA干擾研究，影像技術(shù)，藥物篩選等

在如今發(fā)展起來的眾多報告基因中，熒光素酶報告基因以檢測快速、靈敏度高、線性范圍廣，且在大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞無內(nèi)源性表達等諸多優(yōu)點而備受青睞。

雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)采用螢火蟲熒光素酶(Firefly Luciferase)和海腎熒光素酶(Rellina Luciferase)組成雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炏到y(tǒng)（Dual-Luciferase Reporter Assay），可以較好地體現(xiàn)檢測結(jié)果的精確性。

實驗中螢火蟲熒光素酶與基因表達的特定實驗條件相關(guān)，海腎熒光素酶用來做轉(zhuǎn)染的內(nèi)參，以校正不同樣品之間轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶不需要翻譯后修飾即具有生物活性，一旦翻譯完成即具有報告基因的功能。通過加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應(yīng)過程中會發(fā)出生物熒光，然后可以通過熒光測定儀測定反應(yīng)過程中釋放的生物熒光。

與傳統(tǒng)的共報告基因（如 CAT，β-Gal，GUS）相比，雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)更加靈敏，有望把可能削弱實驗準(zhǔn)確性的內(nèi)在因素（如培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)目和健康狀況的差別、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和裂解效率的差別等）的變化降到最小，而且報告基因的檢測極為快速(30s內(nèi)完成測試)、簡便。

雙熒光素酶報告基因檢測設(shè)計圖及原理圖示

1. 序列分析。

2. 相關(guān)載體亞克隆。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)及報告基因質(zhì)粒、轉(zhuǎn)錄因子的共轉(zhuǎn)染。

4. 熒光素酶活性檢測。

5. 實驗報告。

客戶提交樣本要求：

客戶可以提供構(gòu)建好的含目的調(diào)控元件的報告基因質(zhì)粒，并提供報告基因質(zhì)粒的全部相關(guān)信息。也可以提供目的調(diào)控元件序列及相關(guān)信息，由普健生物將其克隆到相應(yīng)的報告基因質(zhì)粒上。

普健生物的優(yōu)勢：

• 擁有長期的報告基因?qū)嶒灧治鼋?jīng)驗，幫助你合理設(shè)計實驗；

• 高效轉(zhuǎn)染試劑、高靈敏度熒光素酶檢測試劑盒，確保結(jié)果的可靠性；

• 全面的技術(shù)服務(wù)，提供詳細(xì)的原始數(shù)據(jù)和實驗報告。