近年來,基于基因工程原理發(fā)展起來的報告基因技術(shù)逐漸成為最具有發(fā)展?jié)摿蚍治龉ぞ咧弧?
報告基因報告基因是一類編碼可供檢測的酶與蛋白的基因,是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究領(lǐng)域中用于分析基因轉(zhuǎn)錄和調(diào)控的一種便捷工具,可用來分析結(jié)構(gòu)基因旁側(cè)區(qū)域潛在的順式元件(如啟動子、增強子和沉默子等)和反式作用因子間的相互作用關(guān)系。
啟動子是真核基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游一段長度不等的特異性序列,該片段有多種調(diào)節(jié)因子的結(jié)合位點,能順式調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄,因此可以通過檢測啟動子的激活程度間接定量蛋白(如Ⅰ型干擾素)的表達量。
作為報告基因的條件:
編碼產(chǎn)物的活性不受宿主細(xì)胞的干預(yù);
編碼產(chǎn)物在宿主細(xì)胞本身不存在,易區(qū)分;
編碼產(chǎn)物的活性測定必須快速、簡便、靈敏度高、重復(fù)性好。
常用的報告基因:
氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因(CAT)、β-gal、熒光素酶基因(Luc)
報告基因的應(yīng)用:
探討啟動子作用,細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo),基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),作為分子標(biāo)記,生物大分子間的相互作用,RNA干擾研究,影像技術(shù),藥物篩選等
在如今發(fā)展起來的眾多報告基因中,熒光素酶報告基因以檢測快速、靈敏度高、線性范圍廣,且在大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞無內(nèi)源性表達等諸多優(yōu)點而備受青睞。
雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)采用螢火蟲熒光素酶(Firefly Luciferase)和海腎熒光素酶(Rellina Luciferase)組成雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炏到y(tǒng)(Dual-Luciferase Reporter Assay),可以較好地體現(xiàn)檢測結(jié)果的精確性。
實驗中螢火蟲熒光素酶與基因表達的特定實驗條件相關(guān),海腎熒光素酶用來做轉(zhuǎn)染的內(nèi)參,以校正不同樣品之間轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶不需要翻譯后修飾即具有生物活性,一旦翻譯完成即具有報告基因的功能。通過加入特定的熒光素酶底物,熒光素酶與底物反應(yīng)過程中會發(fā)出生物熒光,然后可以通過熒光測定儀測定反應(yīng)過程中釋放的生物熒光。
與傳統(tǒng)的共報告基因(如 CAT,β-Gal,GUS)相比,雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)更加靈敏,有望把可能削弱實驗準(zhǔn)確性的內(nèi)在因素(如培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)目和健康狀況的差別、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和裂解效率的差別等)的變化降到最小,而且報告基因的檢測極為快速(30s內(nèi)完成測試)、簡便。
雙熒光素酶報告基因檢測設(shè)計圖及原理圖示
普健生物雙熒光素酶報告基因檢測服務(wù)1. 序列分析。
2. 相關(guān)載體亞克隆。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)及報告基因質(zhì)粒、轉(zhuǎn)錄因子的共轉(zhuǎn)染。
4. 熒光素酶活性檢測。
5. 實驗報告。
客戶提交樣本要求:
客戶可以提供構(gòu)建好的含目的調(diào)控元件的報告基因質(zhì)粒,并提供報告基因質(zhì)粒的全部相關(guān)信息。也可以提供目的調(diào)控元件序列及相關(guān)信息,由普健生物將其克隆到相應(yīng)的報告基因質(zhì)粒上。
普健生物的優(yōu)勢:
擁有長期的報告基因?qū)嶒灧治鼋?jīng)驗,幫助你合理設(shè)計實驗;
高效轉(zhuǎn)染試劑、高靈敏度熒光素酶檢測試劑盒,確保結(jié)果的可靠性;
全面的技術(shù)服務(wù),提供詳細(xì)的原始數(shù)據(jù)和實驗報告。