支原體感染可引起人類的多種疾病,如呼吸道感染、關節(jié)炎和泌尿生殖道疾病等。研究表明,支原體可引起宿主細胞凋亡,并與疾病的發(fā)生發(fā)展過程有關。
支原體感染與細胞凋亡關系密切,不同種類的支原體引起的細胞凋亡在疾病的發(fā)生、發(fā)展及轉歸中作用也不同。支原體感染細胞后,可直接誘導凋亡,亦可通過局部細胞因子或其他物質間接誘導凋亡。
因此,研究支原體與細胞凋亡之間的關系,對闡明支原體致病機理和臨床上疾病的治療至關重要。
支原體種類繁多、分布廣泛,在細胞培養(yǎng)過程中,支原體污染率高達30%-60%,隨著細胞培養(yǎng)技術的廣泛應用,組織、細胞、疫苗等受支原體污染的現象越來越普遍。細胞受支原體污染一般難以察覺,而支原體又可以通過細胞濾膜,因此難以去除,是細胞培養(yǎng)面臨的一個世界性難題。
>>>>支原體的檢測方法
目前,支原體的檢測方法有很多種,包括培養(yǎng)法、DNA 熒光染色法、酶法、PCR 法、ELISA 法、間接免疫熒光試驗、生化檢測法、直接血凝試驗、探針法、放射自顯影法等,每種方法各有利弊。傳統(tǒng)的支原體檢測方法通常耗時長,操作繁瑣,環(huán)節(jié)多,因此,選擇快速、準確、有效的檢測方法對控制原材料、細胞、生物制品的支原體污染十分重要。
現有一款現成的支原體檢測試劑盒,經實驗驗證,可快速、靈敏、有效的檢測支原體。
普健生物生產的支原體PCR檢測試劑盒是一款具有快速、靈敏、特異性高等特點的支原體檢測試劑盒,可用于細胞、培養(yǎng)基、動物血清等的支原體檢測。本產品通過聚合酶鏈式反應技術(PCR)特異擴增支原體16s rRNA 基因保守區(qū)域片段,進行支原體檢測,能夠檢測包括M. arthritidis,M. hominis,M. hyorhinis,M. fermentans,M. orale,M. salivarium,M. bovis,M. bovigenitalium,M.pneumoniae,M. pirum等在內的數十種常見支原體。
談完了支原體,現在我們來談談細胞凋亡這回事。
細胞凋亡(Apoptosis)是Kerr在1972年提出的,一般是指機體細胞在發(fā)育過程中或在某些因素作用下,通過基因調控的一種程序性細胞死亡。細胞凋亡與細胞生長、分化、消亡以及機體許多生理、病理過程有關。
細胞凋亡過程中,細胞的形態(tài)變化是特有的,表現為:細胞核固縮、染色質凝聚、胞漿濃縮,核染色質密度增高,凋亡小體形成,細胞核染色質DNA被降解為180~200bp寡核苷酸片段,在瓊脂糖凝膠電泳中呈典型的梯狀條帶(曾被認為是細胞凋亡判定的金標準之一)。
但是這種方法既不能檢測單個細胞水平的凋亡,又不能提供細胞發(fā)生凋亡所處的組織位置和細胞分化狀態(tài)等方面的信息。
有問題就有解決方法——TUNEL法TUNEL法:由脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法。細胞凋亡晚期,染色體DNA雙鏈或單鏈斷裂而產生大量的粘性3-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,將熒光素/酶標記的dUTP結合到DNA的3-OH末端,從而可進行凋亡細胞的檢測。
普健生物自產的TUNEL細胞凋亡試劑盒(Fluorescein-12),經過反復試驗、重重把關,現已行走于江湖。一起看一下,它能不能經受住考驗吧。
試劑盒優(yōu)點
1. 靈敏度高
背景染色極低,陽性染色強,可以在單個細胞水平檢測到細胞凋亡。同時由于凋亡早期就有DNA斷裂,可以檢測到早期的細胞凋亡。
2. 特異性好
TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞,而不容易標記壞死細胞,也不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時的斷裂方式不同),既可以把凋亡和壞死區(qū)分開,也不會把射線等誘導發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。
注意:極少數細胞凋亡時沒有DNA斷裂,此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發(fā)現TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下,最好同時檢測多個凋亡指標。
3. 快速方便
只需將固定好的細胞或組織經染色及洗滌后,即可置于熒光顯微鏡或者流式細胞儀下進行凋亡檢測,整個實驗操作僅需1-2小時即可完成。
4. 應用范圍廣
可以用于檢測冷凍切片或石蠟切片中的細胞凋亡情況,也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。
5. 靈活
適于固定的細胞和組織,可以使樣品收集、儲存和運輸成為可能。
6. 質優(yōu)
每一批產品都經過嚴格的質檢。
詳情可點擊 TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒
案例展示
TNBC 組織冷凍切片(200 ×)
LTEP 組織石蠟切片(200 ×)